關(guān)鍵詞:DNA合成|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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DNA合成|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
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測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
DNA復(fù)制的一般過程：
DNA雙螺旋是由兩條方向相反的單鏈組成，復(fù)制開始時(shí)，雙鏈打開，形成一個(gè)復(fù)制叉(replicative fork,從打開的起點(diǎn)向一個(gè)方向形成)或一個(gè)復(fù)制泡(replicative bubble，從打開的起點(diǎn)向兩個(gè)方向形成。)兩條單鏈分別做模板。各自合成一條新的DNA鏈。由于DNA一條鏈的走向是5′→3′方向，另一條鏈的走向是3′→5′方向，但生物體內(nèi)DNA聚合酶只能催化DNA從5′→3′的方向合成。那么，兩條方向不同的鏈怎樣才能做模板呢?這個(gè)問題由日本學(xué)者崗崎先生解決。
原來(lái)，在以3′→5′方向的母鏈為模板時(shí)，復(fù)制合成出一條5′→3′方向的前導(dǎo)鏈(leadingstrand)，前導(dǎo)鏈的前進(jìn)方向與復(fù)制叉打開方向是一致的，因此前導(dǎo)鏈的合成是連續(xù)進(jìn)行的，而另一條母鏈DNA是5′→3′方向，它作為模板時(shí)，復(fù)制合成許多條5′→3′方向的短鏈，叫做隨從鏈(lagging strand)，隨從鏈的前進(jìn)方向是與復(fù)制叉的打開方向相反的。隨從鏈只能先以片段的形式合成，這些片段就叫做崗崎片段(Okazaki fragments)，原核生物崗崎片段含有1000-2000核苷酸，真核生物一般100?00核苷酸。*后再將多個(gè)崗崎片段連接成一條完整的鏈。由于前導(dǎo)鏈的合成是連續(xù)進(jìn)行的，而隨從鏈的合成是不連續(xù)進(jìn)行的，所以從總體上看DNA的復(fù)制是半不連續(xù)復(fù)制。
1、DNA復(fù)制機(jī)理--半保留復(fù)制 
半保留復(fù)制(semiconservative replication)是DNA生物合成的一個(gè)重要特征。是指DNA合成(復(fù)制)時(shí)，雙鏈解開，分別作為模板(template)指導(dǎo)DNA的合成，合成的子代新生雙鏈DNA中，總有一條來(lái)自親代DNA...... 
2、DNA復(fù)制的酶類 
參與DNA復(fù)制的主要物質(zhì)有:底物，即dATP,dGTP,dCTP 和 dTTP，總稱為dNTP; DNA聚合酶(polymerase);模板(template)，即雙鏈DNA解開形成的單鏈;引物(primer),引導(dǎo)新生DNA的產(chǎn)生;其他...... 
3、DNA復(fù)制過程 
DNA復(fù)制時(shí)，首先需要解開雙鏈，再生成引發(fā)體，在引發(fā)體的基礎(chǔ)上開始合成新鏈。復(fù)制中的新鏈總是沿5′向3′端方向延伸，即底物dNTP去掉焦磷酸并以磷酸二酯鍵方式連接在延伸中的DNA鏈3′端的-OH上，一個(gè)接一個(gè)地疊加。由于DNA的雙鏈的走向...... 
4、DNA復(fù)制過程的調(diào)控 
原核及其它低等生物與高等生物DNA復(fù)制的調(diào)控模式可能不同，同一生物的調(diào)控模式也可有不同的變化。對(duì)DNA復(fù)制的調(diào)節(jié)既有正調(diào)節(jié)也有負(fù)調(diào)節(jié)。